本篇帶你了解一下中壓層析柱過柱時的技巧

　　中壓層析柱是凝膠層析技術中的主體，一般用玻璃管或有機玻璃管。根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同，從而分離的一種層析法。

　　它的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，但在加樣時應將樣品均勻分布于柱床面上。

　　此外，直徑加大，洗脫液體體積增大，樣品稀釋度大。分離度取決于柱高，為分離不同組分，柱床必須有適宜的高度，分離度與柱高的平方根相關。

　　主要特點與優(yōu)勢

　　1.高分離效率：在中壓條件下，流動相的流速加快，從而提高了分離效率，尤其適用于快速純化需求。

　　2.良好的生物兼容性：采用醫(yī)療級聚丙烯材質(zhì)，對生物樣品具有良好的兼容性，減少了樣品污染和損失的風險。

　　3.靈活適用性：中壓層析柱可以裝填免疫親和、離子交換、凝膠過濾和反相等多種層析介質(zhì)，使其能夠廣泛應用于抗體、蛋白和其他生物分子的純化。

　　4.串聯(lián)使用能力：多個中壓層析柱可以串聯(lián)使用，進一步增強純化性能，滿足更復雜的純化需求。

　　應用領域

　　1.蛋白純化：廣泛用于抗原抗體、重組蛋白的純化，如使用CommaX™ rProtein A, G, A/G預裝柱進行抗體純化。

　　2.核酸純化：適用于核酸的分離和提純，特別是對于那些需要高純度核酸的應用。

　　3.多肽和其他分子的純化：還可用于純化多肽和其他小分子，如使用CommaX™ His純化預裝柱進行標記蛋白純化。

　　下面讓我們一起來了解一下中壓層析柱過柱的技巧吧：

　　按過柱時的壓力可以分為：加壓，常壓，減壓。壓力可以增加淋洗劑的流動速度，減少產(chǎn)品收集的時間，但是會減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時候，常壓柱是效率較高的，但是時間也較長，例如一些天然化合物的分離，有時一個柱子過幾個月也有可能。

　　減壓柱能夠減少硅膠的使用量，但是由于大量的空氣通過硅膠會使溶劑揮發(fā)，有時會在柱子外面有水汽凝結，另外有些比較易分解的東西可能得不到，而且還必須同時使用水泵抽氣，噪音大，時間長，所以減壓過柱用得比較少。

　　加壓過柱是一種比較好的方法，與常壓柱類似，但用外加壓力可以使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵(用魚缸供氣的加壓泵就行)。特別是在容易分解的樣品的分離中很適用。

　　一般壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會減低分離效果。因為加壓過柱效率高，分離效果較好，所以加壓過柱在普通的有機化合物的分離中是非常適用的。

　　一些低沸點溶劑裝柱時往往會在柱子中產(chǎn)生氣泡，使柱子變花，利用加壓過柱法在裝柱時就可以有效地解決這個問題，而且可以使柱子很快裝實。

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