蛋白層析柱的特性及原理介紹

　　蛋白層析柱在蛋白，多肽，抗體等等行業(yè)中占據(jù)了重要的地位，廣泛應(yīng)用于制備分離的各類化合物。蛋白層析柱在原有蛋白層析分離柱的特性上還兼具了以下特性：

　　1、耐高壓：允許實(shí)驗(yàn)過程中使用較高的流速，加快實(shí)驗(yàn)進(jìn)程以及適合硬基質(zhì)的色譜填料。

　　2、防爆性：可以選擇外貼防爆膜，防止玻璃管子爆裂，對(duì)人員造成傷害。

　　3、可重復(fù)：一根柱管可多次使用，大大節(jié)約了您的成本。

　　4、可見性：分離帶顏色復(fù)雜天然產(chǎn)物，您可以直觀的看到分離色帶。

　　5、篩板：可以提供各種粒徑的篩板，優(yōu)良的分配效果，達(dá)到更好的分離度。

　　6、優(yōu)異的流體結(jié)構(gòu)。

　　蛋白質(zhì)層析通過利用蛋白質(zhì)在流動(dòng)相和固定相中分配不同的原理進(jìn)行分離和純化。 蛋白質(zhì)層析技術(shù)是生物化學(xué)研究中的一個(gè)重要工具，它根據(jù)蛋白質(zhì)的物理和化學(xué)特性實(shí)現(xiàn)高效純化。 

　　定義：蛋白質(zhì)層析是一種利用蛋白質(zhì)在流動(dòng)相和固定相之間不同分配原理進(jìn)行分離純化的技術(shù)。

　　原理：不同蛋白質(zhì)具有不同的物理和化學(xué)特性，如分子大小、形狀、電荷和疏水性等。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液流經(jīng)固定相時(shí)，各組分以不同強(qiáng)度的作用力結(jié)合在固定相上，從而實(shí)現(xiàn)分離。 

　　凝膠過濾層析：利用蛋白質(zhì)分子的大小差異進(jìn)行分離。大分子無法進(jìn)入凝膠顆粒的孔隙，優(yōu)先洗脫;小分子則進(jìn)入孔隙，延后洗脫。

　　離子交換層析：基于蛋白質(zhì)表面電荷的差異進(jìn)行分離。通過改變pH或增加離子強(qiáng)度，使帶電蛋白質(zhì)與固定相的離子交換樹脂可逆結(jié)合并逐一洗脫。

　　親和層析：利用生物大分子的特異性親和力進(jìn)行分離。例如，通過基因工程引入特定標(biāo)簽，使目標(biāo)蛋白與配基特異性結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)高效純化。

　　疏水作用層析：通過蛋白質(zhì)疏水性差異進(jìn)行分離。在高鹽條件下蛋白質(zhì)疏水性增強(qiáng)，與固定相疏水配基結(jié)合，然后逐步降低鹽濃度將蛋白質(zhì)洗脫。

　　蛋白層析柱的工作原理

　　1. 預(yù)處理：在吸附樹脂的生產(chǎn)過程中，一般采用的是工業(yè)級(jí)原料，產(chǎn)品沒有經(jīng)過進(jìn)一步純化處理，樹脂內(nèi)部殘留少量單體，所以在使用之前，需用水溶性溶劑對(duì)其浸泡處理，然后用去離子水通過樹脂層，置換出水溶性溶劑離子方可投入使用。

　　2. 逆流洗柱：用水洗出去水離子及破碎填料，樹脂裝入后，用蒸餾水反洗樹脂層，直至出水清晰、無氣味、無細(xì)碎樹脂為止。再依次用酸堿等浸泡、沖洗樹脂層，至出水呈中性為止。

　　3. 水洗：水洗的主要目的是除去層析柱上所附著的渣滓。

　　4. 吸附：吸附操作自上而下(或自下而上)通液，可采用不同流速，以選取*條件。流出液每隔一段時(shí)間取樣檢測(cè)，達(dá)泄漏點(diǎn)停止吸附，或多柱串聯(lián)達(dá)飽和后解吸。吸附主要是吸取料液中的渣滓或要回收物，該過程應(yīng)控制料液的速度及吸附量，大孔樹脂應(yīng)*浸泡在料液里，以提高吸附效果和運(yùn)行穩(wěn)定性。

　　5. 解吸、再生：解吸操作自上而下(或自下而上)通解吸劑，單柱吸附時(shí)，解吸與吸附操作對(duì)流為佳。解吸劑沸點(diǎn)要低以便回收處理。