層析柱的裝填好壞直接影響其分配效果

　　在蛋白質(zhì)的分離純化過(guò)程中，離不開(kāi)層析柱的使用，但層析柱的裝填好壞，直接影響其分配效果，進(jìn)而影響產(chǎn)品的回收率及純度。
 

　　目前，國(guó)內(nèi)外工業(yè)級(jí)層析柱的裝填方法主要為吸入式和置換式兩種。置換式在裝填小直徑層析柱時(shí)效果很好，但在層析柱直徑較大時(shí)(通常直徑在800mm以上)分配效果較差。因此廣泛采用的裝填方法為吸入式，即通過(guò)層析柱柱頭下壓至層析柱底部，將預(yù)先混勻的勻漿液通過(guò)活塞的方式吸入層析柱內(nèi)。
 

　　層析柱是凝膠層析技術(shù)中的主體，一般用玻璃管或有機(jī)玻璃管。根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動(dòng)相中分配系數(shù)不同，從而分離的一種層析法。柱層析技術(shù)又稱柱色譜技術(shù)，主要原理是根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動(dòng)相中分配系數(shù)不同，經(jīng)多次反復(fù)分配將組分分離開(kāi)來(lái)。

 

　　柱層析操作時(shí)，先在圓柱管中先填充不溶性基質(zhì)，形成一個(gè)固定相。將樣品加到柱子上，用特殊溶劑洗脫，溶劑組成流動(dòng)相。在樣品從柱子上洗脫下來(lái)的過(guò)程中，根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動(dòng)相中分配系數(shù)不同，經(jīng)多次反復(fù)分配將組分分離。層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，直徑大于2厘米，但在加樣時(shí)應(yīng)將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。
 

　　柱層析的上樣也有干法和濕法之分：干法就是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后，在加入少量硅膠，拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。
 

　　干法上樣較麻煩，但可以保證樣品層很平整。濕法上樣就是用少量溶劑(最好就是展開(kāi)劑，如果展開(kāi)劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量)將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移得到的溶液，沿著層析柱內(nèi)壁均勻加入。然后用少量溶劑洗滌后，再加入。